普遍为1.0 x 107 cells/mL。
细胞成团悬浮的原因可能有以下几方面的原因:1)钙,镁离子的存在,用无钙镁离子的平衡盐溶液清洗细胞;2)细胞接触代谢废物堆积导致细胞进入衰退期,细胞状态变差,在悬浮培养时容易成团漂浮;3)支原体污染,进行支原体检测。
首先,在实验室必须保证良好的无菌操作技术,最好的预防方法是定期检测所有细胞接触的材料和物品以保证支原体不被引入培养体系,并鉴定潜在的污染源。
悬浮细胞在传代过程中对代次没有要求,可以一直传代,但需要根据使用者终产品的生产规程和最佳性能,确定最终传代代次。
可以,初始密度1.5 x 106 cells/mL接种,正常培养72 h可以达到10 x 106 cells/mL。
细胞不一样,培养基情况不同。有些细胞培养基接毒前和接毒后不做更换,有些细胞的培养基接毒前后不同。
细胞复苏前期建议使用一次性细胞培养瓶,带透气盖。细胞生长稳定后可使用其他培养容器。
ATCC中可以查到绝大多数细胞培养的详细资料。包括细胞的来源,培养和冻存条件,以及相关文献等资料。
健顺生物除去EB66悬浮细胞株外,其余细胞株均购自ATCC,悬浮细胞由贴壁细胞自主驯化而来,没有经过任何基因改造。